浅析Notch信号通路中的RBP-Jk与癌症的关系

Notch基因是一种跨膜受体蛋白家族，最早发现于果蝇，Notch信号途径的精确调控，对大多数组织的正常发育至关重要，其异常调控可以引起组织发育异常，并导致肿瘤等多种疾病的发生。功能重组信号序列结合蛋白（RBP-Jk），又称CBF-1，是Notch信号通路中主要的下游转录因子，在不同的情况下，可以作为转录抑制剂或活化剂。在小鼠结肠癌模型以及人乳头瘤病毒感染的不同病变宫颈组织上研究RBP-Jk与肿瘤的关系，通过研究RBP-Jk基因在肿瘤细胞上的表达情况，可以为今后在基因水平上进行以Notch信号途径为靶点的分子靶向治疗及新药开发提供了基础。

结肠癌是一种常见的恶性肿瘤，小鼠结肠癌模型是进行结肠癌药物研发的主要模型，许多研究显示，在包括结肠癌在内的众多恶性肿瘤中都有Notch信号组成性激活或者过表达，因此Notch信号的灭活可能为恶性肿瘤的治疗提供一条途径。高危性人乳头瘤病毒（HR-HPV）是宫颈癌发生过程中的重要危险因子，流行病学和临床检测结果提示，所有高危性的HPV病毒感染都可能导致宫颈恶性病变的发生。通过研究HPV病毒与Nortch信号通路之间的关系，以及Nortch信号通路与宫颈癌发病机制之间的关系，为探索宫颈癌的筛查及治疗方法提供了基础。

1、RBP-Jk对结肠癌细胞的作用

肿瘤学的研究需要采用肿瘤动物模型来研究人类肿瘤的病因、发生、发展以及治疗和预防。裸鼠是先天性胸腺缺陷的突变小鼠，裸鼠成瘤实验，即在裸鼠皮下注入肿瘤细胞，观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。美迪西药理学服务可以为客户提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验来进行医药方面的研究。

有研究者研究了Notch信号通路转录抑制因子RBP-JK对结肠癌细胞增殖和裸鼠移植瘤生长的影响及其在小鼠模型结肠癌组织中的表达[1]。方法用Western blot法和Real-time PCR法在8种结肠癌细胞中筛选出RBP-JK高表达的结肠癌细胞RKO及RBP-JK低表达的结肠癌细胞SW480。用RBP-JK基因重组慢病毒载体上调SW480细胞中RBP-JK及靶向RBP-JK的sh RNA慢病毒载体沉默RKO细胞中RBP-JK的表达，构建RBP-JK过表达的SW480细胞(SW480-RBP)及其对照细胞SW480-NC和RBP-JK沉默表达的RKO细胞(RKO-shRBP)及其对照细胞RKO-NC。

MTT法检测SW480细胞和RKO细胞增殖能力的变化。构建转染细胞裸鼠皮下移植瘤模型，连续观察28 d，绘制移植瘤生长曲线，监测移植瘤生长情况；氧化偶氮甲烷(AOM)诱导构建C57BL/6小鼠结肠癌模型，在结肠癌形成过程中每8周留取小鼠结肠组织，Western blot法和Realtime PCR法检测结肠组织中RBP-JKmRNA和蛋白表达的变化。

结果 MTT检测显示，SW480-RBP细胞的增殖速度较对照组SW480-NC细胞显著增快(P<0.05)，RKO-shRBP细胞的增殖速度较对照组RKO-NC细胞显著降低(P<0.05)。裸鼠皮下移植瘤实验显示，SW480-RBP细胞所成肿瘤的体积、质量均高于对照组细胞(SW480-NC)； RKO-shRBP细胞所成肿瘤的体积、质量均低于对照组细胞(RKO-NC)。在AOM诱导的C57BL/6小鼠结肠癌形成过程中，小鼠结肠组织中的RBP-JKmRNA和蛋白表达随着肿瘤形成逐渐升高。因此RBP-JK可以促进结肠癌细胞的增殖和裸鼠移植瘤生长，在AOM诱导的小鼠结肠癌中，RBP-JK蛋白表达增加与其发生发展相关。

2、RBP-JK对宫颈癌细胞的作用研究

研究者观察了RBP-JK基因在人乳头瘤病毒感染的不同病变宫颈组织中的表达情况[2]。方法是采用PCR—DNA反向斑点杂交技术对193例宫颈脱落细胞标本进行HPV基因诊断和分型，RT-PCR方法检测不同病变的宫颈脱落细胞标本的RBP-JK基因表达情况；免疫组织化学方法观察RBP-JK在不同宫颈组织中表达情况。

结果193例标本中，双重感染36例（18.65%），多重感染4例。高危感染153例（79.2%），其中HPV16感染率最高，为38.86%（75/193）。不同宫颈病变的HPV感染有所不同，随着病变程度的增加，HPV亚型分布有所变化，高危型HPV检出率有所增加。RBP-JK/GAPDH基因在慢性宫颈炎组、CIN组、宫颈癌组中的表达分别为0.262±0.233、0.499±0.422、1.094±0.466，3个值之间的差异有统计学意义（P<0.001）。因此RBP-JK相关的Notch信号通路在宫颈癌细胞中有显著的表达，提示RBP-JK的活化与HPV病毒感染后宫颈组织恶变存在一定的相关性。

此外，还有多种研究表明Notch信号通路通路的活化或抑制与多种肿瘤的发生和发展有关，因此调控Notch信号通路可能是肿瘤治疗的一个途径。作为Notch信号通路中主要的下游转录因子，RBP-JK可以促进结肠癌细胞的增殖和裸鼠移植瘤生长，且RBP-JK的活化与HPV病毒感染后宫颈组织恶变存在一定的相关性，在今后随着研究的深入以RBP-JK为靶点的分子靶向治疗以及新药开发将为肿瘤治疗提供了新方法。

[1]RBP-JK对结肠癌细胞增殖和移植瘤生长的影响及其在小鼠结肠癌组织的表达[J].

[2]Notch-RBP-JK路径与HPV病毒感染的宫颈病变的相关性研究[J].