国产重组抗CD20单抗抗肿瘤作用研究

抗CD20单克隆抗体是一类治疗B细胞淋巴瘤的靶向药物，利妥昔单抗Rituximab是第一代抗CD20单抗。目前我国市场上的抗CD20单抗仅有美罗华，也有一些药企在研发抗CD20单抗，基本都是利妥昔的生物类似物。在新药临床前研究中，临床前药效学评价是一个非常重要的环节，它对于保证新药的有效性、发现药物的药效特点、预测临床疗效及指导临床用药都是必不可少的。为了研究我国国产药rh-anti-CD20ximAb的抗肿瘤效果，需要开展临床前药效学研究。

药效学是指对新药预期用于临床的药理作用的研究，即对新药预期用于预防、治疗、诊断作用的研究，用来评价新药的生物活性和确定药物的作用机理。美迪西生物医药是一家临床前CRO公司，专门为客户提供可定制的临床前试验服务方案，拥有十余年研发技术经验积累，在药物代谢、药代动力学、药效研究，以及毒理学方面拥有专业的知识。

以CD20为靶点的单克隆抗体，简称抗CD20单抗。尽管目前CD20的功能并不完全清楚，但是有证据表明抗CD20单抗杀伤B细胞来源的肿瘤和3种作用机制有关，分别是补体依赖的细胞毒作用（CDC, Complement Dependent Cytotoxicity）、抗体依赖的细胞毒作用（ADCC，Antibody Dependent Cell MediatedCytotoxicity），以及抗体与CD20分子结合引起的直接效应，包括抑制细胞生长，改变细胞周期以及凋亡。

1、国产重组抗CD20单抗的体外CDC作用

选用两种CD20高表达的肿瘤细胞，淋巴瘤细胞（Raji细胞）、人淋巴瘤细胞（Daudi细胞)和CD20阴性细胞(MX-1细胞),用乳酸脱氢酶(LDH)法细胞杀伤试验试剂盒检测重组抗CD20单克隆抗体体外对肿瘤细胞的补体依赖的细胞毒作用(CDC作用),并与对照品利妥昔单抗Rituximab比较,评价国产重组抗CD20单抗的体外CDC作用。

国产药rh-anti-CD20ximAb对CD20阳性的Raji和Daudi细胞的体外CDC效应非常明显,而且与对照品Rituximab的溶解细胞的CDC效应非常相似:对Raji细胞的3次重复平均半数有效抑制浓度(IC_(50))分别为740±76 ng/mL和809±39 ng/mL,平均EC_(50)比值为91.31±5.27 %。对Daudi细胞的3次重复平均半数有效抑制浓度(IC_(50))分别为729±57 ng/mL和846±145 ng/mL,平均EC_(50)比值为87.42±7.88%。

2、国产重组抗CD20单抗的体外ADCC作用

选用两种CD20高表达的肿瘤细胞(Raji细胞、Daudi细胞)和CD20阴性细胞(MX-1细胞)作为靶细胞,用人外周血单核细胞(PBMC)作为效应细胞,在不同的效靶比条件下,用乳酸脱氢酶(LDH)法细胞杀伤试验试剂盒检测重组抗CD20单克隆抗体体外对肿瘤细胞的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC作用),并与对照品Rituximab比较,评价国产重组抗CD20单抗的体外ADCC作用。

国产药rh-anti-CD20ximAb对CD20阳性的Raji、Daudi细胞的体外ADCC效应非常明显,而且与对照品Rituximab溶解细胞的ADCC作用非常相近。对于Raji、Daudi细胞，在效靶比分别为100:1、40:1、16:1、6:1情况下,国产药与对照药都随着效靶比的降低,其对Raji和Daudi细胞的杀伤率也随之降低,但二者在相同效靶比下,对Raji和Daudi细胞的杀伤率接近。而对于CD20阴性细胞MX-1,二者对MX-1细胞的杀伤率都在10%以下。

3、国产重组抗CD20单抗的饱和结合试验和竞争性抑制试验

国产重组抗CD20单抗体外与CD20高表达人B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞的高亲和力结合，此实验包括饱和结合试验和竞争性抑制试验。饱和结合结论说明国产rh-anti-CD20ximAb可以与CD20高表达B-淋巴细胞瘤Raji细胞高亲和、可逆性、低容量地结合。竞争性抑制实验结论说明国产rh-anti-CD20ximAb和对照品Rituximab对高表达CD20抗原人B细胞淋巴瘤Raji细胞与125I-rh-anti-CD20ximAb结合的抑制作用相似，二者的IC_(50)值分别为3.13±0.38μg/mL和3.45±0.59μg/mL,两者非常接近。

4、国产重组抗CD20单抗在猕猴体内的实验结果

猕猴静脉滴注重组抗CD20单抗和对照品后，观察猕猴外周血中的B淋巴细胞水平，三个剂量组之间比较及与对照品比较，观察国产药在猕猴体内是否达到了与对照品相似的CDC作用和ADCC作用。流式细胞仪检查表明猕猴药前C20阳性的B淋巴细胞量都在14.37-47.91%之间，各组间比较无统计差别。相同剂量的受试品和对照品(30 mg·kg~(-1)?1)，注射后2h-20d内，二者在统计学上均无明显差别(P0.05)。

2011年我国已有生物医药公司研发重组抗CD20人源化单克隆抗体注射液，并申报临床试验申请。重组抗CD20人源化单克隆抗体注射液是新型人用重组单克隆抗体制品，具有自主知识产权，拟用于CD20阳性的B细胞非霍奇金淋巴瘤的治疗。2013年9月该公司向国家药监局提交了重组抗CD20人源化单克隆抗体注射液的临床试验申请，2013年12月获得受理，2016年收到药物临床试验批件。目前我国多家药企致力于研发抗CD20单抗，预计未来几年会陆续有产品获批上市，从而打破美罗华的垄断局面，同时预计国产的抗CD20单抗的价格优势，可以提升抗CD20单抗在非霍奇金氏淋巴瘤领域的渗透率。

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