抗人CD45的表达及其单克隆抗体的作用简述

CD45是白细胞表面共同抗原，表达在除了红细胞和血小板之外的所有血液细胞上，在免疫细胞如T细胞、B细胞、自然杀伤细胞和巨噬细胞表面等均有表达。目前已有报道称抗CD45单克隆抗体在治疗急性髓细胞白血病AML中的良好前景，也有越来越多的研究集中在CD45对白血病、淋巴瘤和非造血系统肿瘤的鉴别、诊断和治疗，但是由于治疗中药物存在毒性，因此还需要不断的改进。采用哺乳动物表达载体表达抗CD45，为研究抗CD45的生物学功能奠定基础。

1、采用哺乳动物表达载体构建表达抗人CD45细胞株的研究
哺乳动物表达载体是基于临床应用目的的生产重组蛋白的主要系统，已被广泛用于生产单克隆抗体、激素、生长因子、融合蛋白、细胞因子、血液因子、治疗性酶、重组疫苗和抗凝剂等重组蛋白。美迪西生物医药拥有多种蛋白表达系统，包括原核蛋白表达系统、酵母蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统（杆状病毒）和哺乳动物细胞蛋白表达系统，具备多种融合技术，可以为客户在蛋白表达与纯化方面提供多种选择。

研究者构建了两种新型抗人CD45哺乳动物细胞表达载体，利用DHFR系统筛选出能稳定高表达抗CD45基因工程抗体的细胞株，为以人CD45为靶点的研究奠定基础[1]。

(1)首先通过PCR扩增得到抗CD45抗体的轻链可变区VL区和重链可变区VH区基因，通过基因工程技术构建抗人CD45抗体的真核表达载体，得到Anti-CD45-scFv-Fc与pBudce-CD45[H+L]。

(2)将两者转染HEK-293T细胞获得瞬时转染表达，用Elisa方法检测两种真核表达载体的抗体表达量的差异。用流式细胞术检测两种抗体与CD45-/+细胞系的结合。

(3)采用抗原抗体系统和生物素亲合素系统Western blot方法，鉴定抗体与CD45分子的结合特异性。

(4)挑选表达量较高，结合活性好以及具有结合特异性的抗体用于后续实验研究。筛选出稳定高表达Anti-CD45-scFv-Fc的DG44-CHO细胞株。结果成功改造鼠源性单克隆抗CD45抗体，构建了表达抗人CD45抗体的哺乳细胞表达载体Anti-CD45-scFv-Fc，DHFR系统筛选获得稳定高表达Anti-CD45-scFv-Fc的DG44细胞株。

3、抗人CD45单克隆抗体的作用

一些报道称除了成熟红细胞和血小板之外，CD45分子在骨髓前体细胞、外周血和淋巴结成熟细胞、90%以上髓系白血病细胞、大多数淋系白血病和淋巴瘤细胞均有表达，同时在非造血组织中无表达，这一特点使其成为研究恶性血液系统靶向治疗的理想抗原。CD45分子在白血病鉴别诊断和免疫分型中具有重要意义，利用CD45可以鉴别白血病的微小残留病灶，目前抗CD45单克隆抗体主要应用于血液系统疾病的免疫分型检测。

由于CD45分子广泛高表达于几乎所有白血病标本，与抗体结合后无内化效应，尤其重要的是在非造血组织无表达，目前已经成为造血干细胞患者靶向放射免疫治疗的首选抗原。

在恶性血液病治疗方面，已有文献报道抗CD45单抗可有效清除淋巴细胞、抑制排斥反应和诱导免疫耐受，同时作为载体与各种偶联物联合发挥靶向抗肿瘤作用。白血病高危患者抑制后的高复发率比较难以克服，早期研究显示，增加全身TBI剂量可以有效降低移植后复发率，但是TBI剂量增加导致的治疗相关死亡也随之增加，总体无病生存率较前并无明显改善。

目前以单克隆抗体为载体联合放射性核素的靶向放射免疫治疗被寄予厚望，以期达到增加照射剂量减少复发的同时，进一步减少治疗相关死亡。例如在白血病的治疗当中，213Bi标记的抗CD45单克隆抗体能够诱导化疗耐受的白血病细胞株的凋亡，放射性元素标记的CD45抗体能够做到骨髓消除，减轻患者移植后的排斥反应，而对抗CD45单克隆抗体的进一步研究有可能为血液系统恶性肿瘤的治疗提供新的手段。

建立抗人CD45哺乳动物表达载体，为进一步揭示CD45的生物学功能奠定了物质基础。而随着对CD45分子基因结构和功能的深入研究和认识，CD45在淋巴细胞发育、活化中的作用及其机制等问题的阐明，其在疾病的诊断、治疗和预后等方面将发挥更大的作用。

[1] 抗人CD45抗体哺乳细胞表达载体的构建、表达与鉴定[J].