T细胞因子4与肾癌的关系

肾癌是泌尿生殖系常见恶性肿瘤之一,具有较高的发病率，恶性程度高、侵袭性大、预后差，但是目前其发病机理尚不清楚。Wnt/Frizzled信号通路是近年来发现的一条与肿瘤发生相关的重要信号通路，正是此信号通路的变异导致了某些肿瘤的发生。研究者通过肾癌酵母双杂交文库构建，发现了在肾癌的发生中,Wnt信号通路发挥了重要作用。

后来又有研究者发现Wnt信号通路的重要调节因子T细胞生长因子4（TCF4）与肾癌有关。通过构建肾癌酵母双杂交文库及hTCF4酵母双杂交表达载体，发现肾癌中存在Wnt信号通路，其重要信号分子hTCF4与β-连环蛋白相互作用，尚可以自身相互作用形成同源二聚体或同源共聚体，从而发挥其转录因子的作用。

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1、Wnt/Frizzled信号通路与肾癌的关系

构建肾癌的酵母双杂交文库,研究肾癌中的信号传导尤其是Wnt/Frizzled信号通路在肾癌发生、发展中的作用，寻找具有生物意义的小肽。

方法：提取肾癌组织的mRNA ,逆转录合成cDNA，SalI/NotI酶切后基因重组法定向克隆于穿梭质粒pPC86中 ,转化DH5α菌后扩增。　

结果：文库大小为 6×10*6,SalI/NotI酶切鉴定，插入cDNA片段多为 1～ 3kb。　

结论：肾癌pPC86酵母双杂交文库构建的成功为研究肾癌发生机理、诊断和治疗，尤其是信号分子通路治疗提供了有效的工具。

在此之前有研究表明，Wnt信号分子与细胞膜上的7跨膜受体Frizzled结合之后,通过DSH抑制糖元合成激酶3B(GSK-3B)及结肠腺癌样息肉基因产物(APC)对细胞浆内B-环蛋白(B-catenin)的磷酸化，从而使细胞浆内B-catenin浓度增高，之后B-catenin进入细胞核，启动了肿瘤发生的某些基因，导致肿瘤形成。

2、肾癌与TCF4的关系

1996年研究者发现B-catenin的入核过程是由TCF(T cell factor)来完成的。TCF家族包括TCF1、TCF3、TCF4等，具有高度保守的HMG Box，属于核内的一种转录因子，调控着下游基因的表达。其中TCF4在哺乳类上皮中表达，与上皮细胞的发育、分化及肿瘤的发生密切相关。TCF4作为核内转录因子可携带上游信号分子B-catenin入核，并启动下游基因c-myc的表达，是核内基因调控的重要分子。而最新的研究表明，TCF4作为转录因子在缺乏B-catenin的情况下，其与CEBP结合蛋白CBP或Grouch结合，对其靶基因起抑制作用，从而抑制下游基因的表达,防止细胞的恶性转化。

原癌基因c-myc在肾癌中高表达已被公认，但对其高表达的原因及机理认识尚不清楚，后来研究者证明了c-myc表达调控是由TCF4来完成的。在Wnt信号下，B-catenin与TCF结合成复合体，消除了TCF4-CBP/Grouch的抑制作用，而起到了辅激活物的作用，启动c-myc的表达，促使了肿瘤的发生。

实验结果表明TCF4在肾癌中强表达,而在正常肾组织中低表达，这与B-catenin与TCF4结合使TCF4核内含量减少，正反馈使其表达增强有关，当然其具体机理尚需进一步证实。研究表明，Wnt信号并不是在所有肾癌中都表达的，因此,那些Wnt信号表达阴性的肾癌是如何发生的这一问题一直困扰着研究者们。

在肾癌中TCF4存在着发生率较低的突变，这或许能解释上述现象。因此研究者认为TCF4基因在肾癌中可能存在有剪切性突变，形成了300bp左右的突变基因，对该基因的进一步克隆与鉴定正在进行中。该突变可能使TCF4DNA结合域上丢失了抑制协同子CBP、Grouch或p300的结合位点,使在无B-catenin的状态下的TCF4抑制作用丢失,从而靶基因过表达,肿瘤发生。Mayer等研究表明,TCF基因的剪切性突变可能与肿瘤晚期的侵袭性有关。

为研究肾癌中Wnt／Frizzled信号通路的传导，尤其是TCF4(T Cell Factor)的作用。通过酵母双杂交技术，进行肾癌酵母双杂交文库构建，同时构建hTCF4酵母双杂交表达载体，以hTCF4为诱饵蛋白，从肾癌酵母双杂交文库中钓出与hTCF4相互作用的蛋白。

结果共钓出与hTCF4相互作用的阳性克隆67个，其中包括β-连环蛋白，TCF4，转录激活因子5，锌指蛋白和人类基冈组文库克隆1980等。

因此，肾癌Wnt/Frizzled信号分子TCF4基因的mRNA水平高表达及剪切性突变与肿瘤发生、发展及其侵袭性有关,进一步研究将有助于阐明肾癌的发生机理。