浅析TCR试验在毒理研究的动物种属选择上的作用

在生物技术药物的研发领域，单克隆抗体类药物由于具有广泛的临床应用前景，已经成为了研究热点。组织交叉反应（TCR）试验是在临床前评价单抗类药物的安全性的重要手段，不仅可以确定非临床安全性试验的相关动物种属，还可以预测药物的毒性靶器官。目前免疫组织化学技术、组织芯片技术、Western印迹分析技术以及流式细胞等技术也都开始应用于组织交叉反应试验。

单克隆抗体药物具有对抗原结合的特异性，可作用于表达其抗原表位的靶组织。因此如果在正常组织中存在相同或相似的抗原表位，单克隆抗体可能会与靶组织以外的其他组织发生结合，从而产生严重的不良反应。开展TCR试验是区分“在靶”结合的靶器官和“脱靶”结合的非靶器官的重要手段，同时还可以用于毒性评价的动物种属的选择提供参考。

相关动物种属指的是表达与人相同的靶抗原并表现出相似的组织交叉反应特性的动物种属。目前,主要使用体外免疫组织化学、Western印迹分析等的方法,在正常人及实验动物组织评估有无交叉反应,要求在新药临床申请Ⅰ期临床试验前完成。

毒理研究的目的是了解毒性反应剂量、时间、强度、症状、靶器官及可逆性等，为临床方案提供参考、预测出现的毒性反应，制订临床防护措施、保证受试者用药安全。美迪西毒理研究设置的功能实验室包括：动物饲养室、中心实验室、毒代实验室、分子生物学实验室、细胞室、遗传毒性实验室、病理实验室、解剖室、供试品保管室、供试品配置室、档案室等。内设SPF级实验室、大动物实验室和普通实验室，可进行猴、狗、家兔、豚鼠、大鼠、小鼠等不同种属动物实验研究。

组织交叉反应(TCR)是用于评价抗体或抗体类生物技术药物与人或实验动物组织是否存在潜在结合位点的实验方法。如在西妥昔单克隆抗体与正常人的组织交叉反应的研究中，有研究者评价了西妥昔单克隆抗体与正常人组织的免疫交叉反应,并与已上市对照药物爱必妥组织交叉反应的结果进行比较,评价西妥昔单抗与上市对照品爱必妥的一致性,为西妥昔单抗药效学、安全性评价中所使用动物种属的选择及西妥昔单抗临床使用与研究提供依据。

还有研究者采用免疫组化方法检测人源性单克隆抗体与人和食蟹猴冰冻组织的组织交叉反应。该实验选用灵敏性高的ABC法,基本原理为冰冻组织切片加入一抗,再加入生物素标记的二抗,再加ABC复合物(含HRP)与生物素(Biotin)结合,HRP催化DAB显色等等。

当相同或相关抗原决定簇在人非预定的细胞或靶组织表达时，可观察到抗体与它们结合。非靶组织结合可能具有严重后果，特别是使用药理活性抗体或细胞毒性免疫结合物时。因此，一般在I期临床试验前应经过用人组织或细胞进行交叉反应性或非靶组织结合的实验室检测。然而组织交叉反应在动物种属选择中作用有限，因此在充分暴露并评估药物的安全性的研究时，需要建立和完善生物技术药物的临床前的安全评价体系的基础，并根据药物作用机制设计和开展试验，选择适宜的实验动物，设定合理的试验剂量和检测恰当的生理指标。