浅析肝母细胞瘤靶向性治疗的2个潜在靶点

肝母细胞瘤是一种原发性肝脏恶性肿瘤，多药化疗以及手术治疗是其治疗手段，近年来国内外研究者对高危肝母细胞瘤的诊疗也进行了大量研究包括基因靶向治疗、抑制肿瘤相关基因的表达以及肿瘤免疫治疗等手段。最近有研究者发现了肝母细胞瘤治疗的潜在靶点，分别是GREB1蛋白和EZH2，这有望帮助后期开发治疗肝母细胞瘤的方法。进行蛋白表达纯化研究，有用于获得足够多的蛋白来研究其生物学活性。研究发现（蛋白甲基转移酶）EZH2蛋白的过表达在许多不同类型的肿瘤如乳腺癌、膀胱癌等中发现，与肿瘤的侵袭、演化以及不良预后有关。而雌激素调控蛋白（GREB1）是雌激素E2诱导肿瘤进展的靶向基因，在肿瘤进展中有促进增殖的作用。

肿瘤是一种基因病，细胞的DNA损伤和突变是诱导恶性肿瘤发生的重要原因，到目前为止人们已经发现了很多原癌或者抑癌基因的突变会诱发癌变或者增加患癌的风险。肿瘤靶向治疗可以针对已经明确的致癌位点，来设计相应的治疗药物。药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞，有助于减少化疗药物的耐药，提高癌症治疗疗效，并克服化疗的毒副作用和提高患者的生活质量。对抑癌或者原癌基因的编码蛋白进行蛋白表达纯化研究，获得的纯化蛋白有助于进一步阐明该蛋白的生物学功能，方便后续的肿瘤治疗方法的研究。

1、GREB1蛋白有望成为肝母细胞瘤治疗的潜在靶点

随着全基因组测序技术日新月异的发展，科学家们可以获得一种生物编码的所有蛋白的信息，有助于在细胞水平甚至生物体水平上研究蛋白结构、功能和蛋白质间相互作用。GREB1是雌激素受体调节通路中早起反应基因，在乳腺癌、前列腺癌及前列腺增生中发挥着重要的调节作用。GREB1是雌激素E2刺激乳腺癌细胞生长的关键调节因子，有研究者发现LRH-1可以调节乳腺癌细胞中E2对GREB1基因的表达，敲除GREB1基因能降低癌细胞体外增值率，提高体内移植癌细胞的小鼠存活时间。

采用基因工程技术获得目的蛋白，有助于后续的基因生物学功能的研究。美迪西生物医药拥有多种蛋白表达系统，包括原核蛋白表达系统、酵母蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统（杆状病毒）和哺乳动物细胞蛋白表达系统，具备多种融合技术，可以为客户在蛋白表达与纯化方面提供多种选择。从方案设计、基因优化、表达条件优化到纯化的技术体系，以提高目的蛋白表达水平。

最近来自大阪大学的科学家们对GREB1蛋白进行详细研究后，发现GREB1是肝母细胞瘤发生过程中的一个关键角色；研究者Akira Kikuchi指出，小鼠肝癌模型中β-连环蛋白的过量表达会导致肿瘤的形成以及GREB1的增加，如果能够抑制GREB1的产生，就能观察到肝母细胞瘤细胞增殖水平的下降，以及研究动物中肿瘤产生量的减少。由于GREB1在细胞核中处于激活状态，因此研究者就想尝试利用氨基桥接核酸修饰反义寡核苷酸来抑制肿瘤的形成，这些小型的单链DNA分子能够通过与mRNA的结合来特异性地干扰靶向蛋白的产生，GREB1靶向性寡核苷酸能够成功减少GREB1的产生并抑制肝母细胞瘤肿瘤的产生。

最后研究者表示，利用这种新型策略，未来研究人员有望利用GREB1靶向性疗法来特异性的靶向抑制肝母细胞瘤，从而治疗患者并改善患者的生活质量。

2、肝母细胞瘤潜在治疗分子靶点之EZH2

有研究者采用Western blot方法对肝母细胞瘤标本和正常对照组标本中EZH2蛋白水平检测，构建EZH2 RNA干扰序列(shRNA)慢病毒(1entivirus)载体，让EZH2shRNA慢病毒感染了肝母细胞瘤细胞株Huh6和HepG2，采用Western-blot，流式细胞仪等方法检测细胞株病毒干扰后相关蛋白表达水平，细胞生长及细胞周期变化情况[1]。结果发现EZH2在肝母细胞瘤组织中存在异常表达；细胞株EZH2干扰后细胞生长抑制，细胞周期出现G1/S阻滞，提示EZH2对肝母细胞瘤的生长及细胞周期具有一定的作用；EZH2可能通过抑制p27的表达来促进肝母细胞瘤生长，具体的分子机制仍需进一步研究。因此EZH2可以成为肝母细胞瘤潜在治疗分子靶点。

放疗和化疗是当前肿瘤治疗的常规手段，但是该治疗手段容易导致肿瘤产生抗药性， 致使疗效欠佳。另外放化疗后肿瘤的复发也是临床治疗中的常见问题。发现肿瘤治疗的靶点，并针对该靶点研究相应的药物，有利于克服传统细胞毒药物选择性差、毒副作用强、易产生耐药性等特点，对于抗肿瘤药物的研发至关重要。

[1] EZH2作为肝母细胞瘤潜在治疗分子靶点的研究[J].