细胞活力测定方法之台盼蓝染色法

台盼蓝染色法是一种可以对细胞存活率进行精确定量的方法，可以非常简便和快速地区分活细胞和死细胞。对细胞存活率进行测定的方法是一项重要的细胞实验服务内容，测定细胞活力可以了解细胞所处的生长周期。通过对细胞活力的检测来评价细胞的生长状态，已被普遍用于药物的细胞毒性研究等领域。
1、台盼蓝法测定细胞活力的原理
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，因此在试验前需要知道其中活细胞的情况或者区分死细胞与活细胞。总细胞中活细胞所占的比例叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离过程对细胞是否有损伤作用，复苏后的细胞也要检查活力了解冻存和复苏的效果。细胞实验服务可以研究生长因子、激素及癌基因产物等对细胞的增殖或抑制细胞的增殖作用的影响。上海美迪西提供细胞实验服务，其生物部在分子生物学、细胞生物学、体外生物学和结构生物学领域有丰富广泛的经验。从最初的cDNA文库构建到药物设计，通过蛋白质纯化，结构测定和分析测定，提供一套完整的生物学服务。
正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。因此用台盼蓝染细胞，死细胞着色变成深蓝色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞，利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可以测定细胞相对数和相对活力。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
2、台盼蓝染色法测定细胞活力的应用
（1）台盼蓝染色法测定茶多酚EGCG对鼻咽癌细胞增殖作用
研究者研究了茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养鼻咽癌细胞的抑制作用[1]。方法是选用HNE1细胞系，采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和台盼蓝染色法检测不同浓度EGCG分别在给药不同时间后对HNE1细胞体外增殖的抑制作用。结果MTT法和台盼蓝法都发现EGCG对HNE1细胞体外增殖的抑制作用有浓度-时效关系。这两种方法都适用于检测EGCG对HNE1细胞体外增殖的抑制作用，因此EGCG也许能用于鼻咽癌的预防和治疗。
（2）台盼蓝染色法测中药复方抑制血管平滑肌细胞增殖作用
研究者观察了辛通畅络中药复方对慢性肾脏病心血管危险因素的改善作用，通过台盼蓝染色和MTT测定该中药复方对体外血管平滑肌细胞增殖的影响。方法是大鼠按每天15g/kg剂量，灌胃给药，连续灌服10d，于最后一次给药后2~3h，股动脉放血，分离血清，即为中药血清，经56℃，30min灭活后，分别配成含10、20、30%中药血清的培养液备用，以正常大鼠血清为对照。用含辛通畅络中药处方不同浓度血清培养血管平滑肌细胞，用台盼蓝活细胞计数法及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测活细胞数目和细胞生长抑制率。
实验结果显示:24h、72h经不同药物浓度血清培养后，与对照组相比，培养24h后，20%药物组、30%药物组均较其在统计学上有显著差异(P<0.01)；培养72h后培养24h后，10%药物组较对照组在统计学上有显著差异(P<0.05)，20%药物组、30%药物组均较其在统计学上有显著差异(P<0.01)。因此辛通畅络中药复方抑制血管平滑肌细胞增殖，从而防治慢性肾脏病早期动脉粥样硬化所致的血管重构。
3、台盼蓝染色法的注意事项
（1）应在室温条件下保存。
（2）有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
（3）在细胞计数实验中，镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需要重新制备细胞悬液。
（4）死细胞能被台盼蓝染上色，镜下可见深蓝色的细胞；活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。
[1]茶多酚EGCG抗鼻咽癌的体外实验研究[J].
[2]台盼蓝活细胞计数法检测中药复方对血管平滑肌抑制作用[J].