侵袭性真菌感染标本采集

侵袭性真菌感染标本采集

概况

    标本的采集、接收与保存是真菌检验的一个重要环节，合格的标本是保证检验结果正确性的重要条件。

    适合于深部真菌检验的各类标本包括血及骨髓液、各种体液、脑脊液、痰、支气管肺泡灌洗液、支气管毛刷、肺穿刺物、组织活检标本、尿、粪、脓、尿道及阴道分泌物、咽拭子等。

标本采集部位消毒

    一步法：葡萄糖酸氯己啶作用30s，或70%异丙醇消毒后自然干燥。

    三步法：

    (1) 70%乙醇，待干30s以上

    (2) 1%-2%碘酊（直径达75px以上），作用30 s或10 %碘伏60 s

    (3) 70 %乙醇脱碘：对碘过敏的患者，用70%乙醇消毒60s

标本的采集与处理－血液

    推荐在抗真菌药物使用前，发热初期或寒战期取静脉血或骨髓液。

    采集血液后立即注入血培养瓶内并轻轻摇匀。

    至少采集2套。标本与培养基比例为1/10-1/5（必须包括需氧瓶或真菌专用瓶，成人每瓶8-10ml）。

标本的采集与处理－血液

    2小时内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。

    评估导管相关性血流感染（CRBSI）：

    患者已拔管－采集2套外周血培养，同时做导管尖Maki法半定量培养（导管尖长度125px），如1套及以上阳性，导管尖培养阳性（≥15 CFU），且培养菌种相同，即为CRBSI。

    患者尚未拔管－至少采集1套外周血培养，同时采集等量的导管血进行培养，如导管血与外周血均阳性，即为CRBSI；如导管血培养阴性，外周血培养阳性且为念珠菌属，且没有其它明确感染源，也可能为CRBSI。

标本的采集与处理－骨髓

    标本采集：使用肝素化的注射器或溶解离心管采集骨髓液0.5ml（儿童）至3ml（成人）后送检。

    标本处理：15分钟内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。不建议常规做骨髓液培养，如需培养可将骨髓液接种于培养瓶，但易出现假阳性。骨髓液 需同时做吉姆萨染色镜检。

标本的采集与处理－静脉导管

标本采集：剪取导管尖段125px置于无菌容器中送检。

标本处理：15分钟内常温送检。若不能及时送检，则4℃保存。将导管置于血平板上，使用无菌镊子将其从平板一端滚动至另一端，滚动4次，做导管尖Maki法半定量培养。不要使用含放线菌酮的培养基。

标本的采集与处理－脑脊液，心包液，腹水和关节液

标本采集：除脑脊液外，将其余的无菌体液置于含肝素的无菌真空采血管。脑脊液使用脊髓穿刺针采集于无菌试管中送检。

标本处理：

15分钟内常温送检。若不能及时送检，则常温保存（不能冷藏）。标本大于2ml，则2000g离心10分钟，取沉渣接种。

若标本量少于2ml，则将标本直接接种于培养基。

推荐使用细胞离心机对无菌体液进行涂片镜检。脑脊液也可直接接种于血培养瓶。

标本的采集与处理－脓液、引流液、创面分泌物及窦道

标本采集：

开放性创口：用无菌生理盐水冲洗创面后，应采集病灶活动性边缘组织标本。

封闭性脓肿：局部皮肤消毒后用注射器抽取脓血性液体送检。

标本处理：2小时内常温送检。将标本直接接种于培养基。较浓稠的标本需使用消化液处理。

标本的采集与处理－下呼吸道标本（深部痰液，支气管吸取物，肺泡灌洗液）

标本采集：清洁口腔后采集清晨第一口痰液。采用外科方法进行支气管毛刷取样和采集肺泡灌洗液。唾液或24小时痰液都不能用来进行真菌培养。

标本处理：2小时内室温送检；若不能及时送检，则4℃保存。将标本接种至含抗生素的选择培养基中。较黏稠的下呼吸道标本需要使用消化液处理，并2000g离心10分钟后取沉渣接种。

标本的采集与处理－眼（角膜刮片、玻璃体液等）

标本采集：一般由临床医生操作；角膜刮片，针吸玻璃体液

标本处理：15分钟内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。角膜刮片直接接种至不含抑制剂的培养皿中，采用X或C型涂菌方式；玻璃体液离心后取沉淀物接种。

标本的采集与处理－组织标本

采集标本后用无菌容器转运，如标本量较少，应滴加几滴无菌盐水保湿。

标本处理：及时送检，或室温保存。

培养标本使用灭菌眼科剪将标本剪成米粒大小后接种；

怀疑组织胞浆菌感染应对组织进行研磨，或使用裂解离心技术进行处理，以使组织胞浆菌释放出来；

怀疑接合菌感染的组织则直接接种。

镜检组织标本需进行研磨，但这一操作会影响丝状真菌培养阳性率，组织镜检建议病理科与检验科联合检测。

组织标本最好接种到包含抗生素和血的培养基中。

标本的采集与处理－尿液

标本采集：采集早晨第一次清洁尿液、耻骨上联合穿刺尿液或导管尿液10-50ml；不能采用24小时尿液。

标本处理：2小时内常温送检；若不能及时送检，则4℃保存。

尿液接种前需要2000g离心10分钟，取沉渣进行镜检和接种。

尿液真菌培养不推荐定量检测。

不合格标本

• 标本标识与申请单不符，标识错误或没有标识；

• 标本未按规定采集于无菌容器或容器选择不恰当；

• 采集标本时未按规定作消毒或清洁创口；

• 标本采集量过少；

• 标本保存方式不恰当或保存时间超过规定；

• 血培养瓶中有凝块；

• 血培养瓶破碎，损坏，渗漏或过效期；

• 血培养瓶数不够；

• 稀薄唾液或低倍镜下上皮细胞数大于10个；

• 采集尿液标本未清洁会阴部及尿道口。