中药药剂学辅导：注射剂的热原（一）

中药药剂学辅导：注射剂的热原（一）


一、热原的含义与来源：
　　1、含义

　　热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。

　　注入人体的注射剂中含有热原量达1μg/kg就可引起不良反应，发热反应通常在注入1小时后出现，可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。该现象称为“热原反应”。

　　2、来源：

　　细菌性热原是由细菌在生长、繁殖过程中产生的代谢产物，以及细菌死亡后从细菌尸体中释放出内毒素等混合而成。当细菌存在于药液中，并具备细菌生长繁殖的条件，如水分、适宜细菌生长的温度与酸碱度，又有足够的营养物质，细菌就会快速生长繁殖，就有可能产生热原。大多数细菌和霉菌都能产生热原，热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。其化学组成因菌种不同而有所差异。分子量为5×104～5×105，分子量越大致热作用也越强。

　　二、热原的基本特征：

　　1、水溶性：热原能溶于水，其浓缩液往往有乳光。

　　2、耐热性：热原在60℃加热1小时不受影响，100℃也不会分解，120℃加热4小时能破坏98%左右，在180℃～200℃干热2小时或250℃上干热45分钟，650℃1分钟可彻底破坏。通常采用的注射剂灭菌条件下，热原不能被破坏。

　　3、滤过性：热原体积小，为1～5nm，能通过一般的除菌滤器，不能截留除去。但用小于1nm孔径的微孔滤膜或超过滤器滤过，则可滤去绝大部分甚至全部热原。

　　4、不挥发性：热原本身不挥发，溶于水，但可随水蒸气的雾滴夹带入蒸馏水中，故蒸馏水器均设隔膜装置。

　　5、可吸附性：热原能被活性炭、白陶土、硅藻土等吸附，但属非特异性吸附，药物也会被吸附而损失；同时可被离子交换树脂，尤其阴离子交换树脂所交换而除去。

　　6、可被强碱、强酸、氧化剂等破坏，故可用强碱或强酸、清洁液来处理带热原的容器。

　　三、注射剂污染热原的途径：

　　1、由溶剂带入：

　　注射用水含热原是注射剂污染热原的主要来源。由于蒸馏器结构不合理，操作不当，容器不洁，放置时间过久等都会污染热原。注射剂的配制，溶剂最好是新鲜制备的溶剂。

　　2、原辅料带入：

　　某些原辅料，如中药提取物、蔗糖、含蛋白为主生物制品等，由于细菌容易繁殖而引起热原污染。

　　3、容器与设备带入：

　　配制注射剂的容器、用具、管道、滤器等，使用前未彻底清洗、灭菌和除尽热原，均有可能污染热原。

　　4、制备过程与生产环境带入：

　　工作人员不按操作规程生产，操作时间过长，环境未净化和气温太高，产品未及时灭菌或灭菌不彻底，都能增加污染机会而产生热原。

　　5、使用过程带入：

　　有时注射用输液本身并不含热原，而是输液用器具，如：胶皮管、艾裴氏滴管、针头等未除净热原而污染。

四、除去注射剂中热原的方法：
　　1、除去药液或溶剂中热原的方法

　　①吸附法：

　　常选用优质活性炭（针剂用），常用量为0.1%～0.2%（g/ml）。热原多时，用量可增加至0.5%（g/ml），加热至60℃～80℃，15～30分钟，吸附处理，此外还有脱色、助滤作用；还可吸附药物成分（生物碱、黄酮类等），注意使用量。

　　也可与硅藻土配合应用，除去热原效果好。

　　②离子交换法：

　　由于热原这类大分子上含磷酸根与羧酸根，往往带有负电荷，故易被强碱性阴离子交换树脂所交换，从而除去热原。

　　③凝胶过滤法：

　　分子筛滤过法，凝胶物质为滤过介质。适用于药物分子量（生化制剂）明显大于热原分子。

　　④超滤法：

　　用特制的微孔滤膜（孔径一般为5～50nm）可除去热原，依靠压力与流速，滤过速度快。要正确掌握超滤操作方法，方能有效。

　　⑤反渗透法：

　　三醋酸纤维素膜或聚酰胺膜出去热原。

　　2、除去容器、用具上热原的方法

　　①高温法：

　　凡能耐受高温处理的容器、用具，如注射用玻璃针筒及其他玻璃容器，在洗净后于250℃加热半小时以上，可有效地破坏热原。

　　②酸碱处理法：

　　热原可被强酸或强碱所破坏，所以玻璃、瓷制及塑料可用酸液或碱液处理，以重铬酸钾－硫酸清洁液浸泡更为方便。

　　此外，加强预防。

　　五、热原的检查方法：

　　1、家兔致热试验法：药典法。

　　将一定量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定的方法。具体工作、环境、家兔的条件及操作方法，应严格按《中国药典》1995年版热原检查项下规定执行。

　　2、鲎试验法：

　　本法利用一种低温海洋动物-鲎的血细胞（变形细胞）溶解物（又称鲎试剂）与微量细菌内毒素或热原发生凝胶反应，从而检测微量的内毒素或热原的一种实验技术。该法实质上是一种酶反应，因为鲎血细胞中含有一种高分子量的凝固酶原和一种可凝固蛋白原，前者经内毒素（即热原）激活转化成具有活性的凝固酶，通过酶解作用，使凝固蛋白原转变成凝固蛋白，凝固蛋白又经过交联酶的作用相互聚合形成凝胶。

　　胶凝的速度与内毒素浓度成正比。已知反应的最适温度为36℃～38℃，最适pH值为6～7.5。

　　本法虽具有操作简便、迅速、灵敏度高（比兔法高10倍左右）等优点，但若操作不当，会出现一定数量的假阳性反应，且尚未法定，一般多作预测和筛选试验，对革兰阴性杆菌以外的内毒素不敏感。